Досвід виділення, індикації і ідентифікації нетуберкульозних мікобактерій, отриманий під час I Національного дослідження поширення хіміорезистентного туберкульозу в Україні
DOI:
https://doi.org/10.30978/TB2019-2-63Ключові слова:
нетуберкульозні мікобактерії, поширення, виділення, ідентифікаціяАнотація
Мета роботи — вивчення наявності нетуберкульозних мікобактерій у циркулюючій мікобактеріальній популяції хворих на туберкульоз, що брали участь у дослідженні поширення хіміорезистентного туберкульозу в Україні, з’ясування етіологічної ролі нетуберкульозних мікобактерій, їхнє виділення та ідентифікація, вивчення деяких морфологічних та біологічних властивостей.
Матеріали та методи. Мазки мокротиння від пацієнтів досліджено на наявність кислотостійких бактерій шляхом прямої мікроскопії після забарвлення за методом Ціля—Нільсена. Для всіх зразків з позитивними результатами мікроскопії виконано весь спектр бактеріологічних досліджень з діагностики туберкульозу, згідно з алгоритмом, схваленим наказом МОЗ України № 620. Проведено бактеріологічні дослідження з ідентифікації клінічних ізолятів за стандартними методиками, викладеними в наказі МОЗ України № 45. Видова ідентифікація культур складалася з двох етапів: первинного та остаточного.
Для посіву використано такі середовища: рідке — бульйон Middlebrook 7Н9 і щільне яєчне Левенштейна—Єнсена. Передпосівну обробку клінічного матеріалу здійснювали за допомогою 0,5 % стерильного розчину N-ацетил-Lцистеїну з 1,0 % натрію гідроксиду (BBL Mycoprep NALC-NAOH). Пробірки поміщали в систему ВАСТЕС МGIТ 960 та інкубували. Засів здійснювали паралельно на щільне середовище Левенштейна—Єнсена.
Для ідентифікації штамів використовували ID МТВ MGIT тест і визначали спроможність росту клінічних ізолятів мікобактерій на середовищі з салiциловокислим натрієм та паранiтробензойною кислотою (для визначення належності мікобактерій до туберкульозного комплексу).
Для остаточної ідентифікації мікобактерій застосовували генетичну тест-систему GenoType® MTB DR (Нain, Laifsains), що дало змогу визначити вид нетуберкульозних мікобактерій.
Результати та обговорення. Отримано 1598 клінічних ізолятів мікобактерій. З них 48 (2,9 %) клінічних ізолятів ідентифіковано як нетуберкульозні мікобактерії. Наведено схему первинної ідентифікації нетуберкульозних мікобактерій.
У структурі нетуберкульозних мікобактерій переважали нефотохромогенні — 77,1 %. Фотохромогенні мікобактерії виділено у 16,7 %, мікобактерії, що швидко росли, — у 6,3 %.
Для визначення видової належності нетуберкульозних мікобактерій використали систему GenoType® MTB DR (Нain, Laifsains). Виділено такі нетуберкульозні мікобактерії: M. kansasii, M. xenopi, M. avium, M. fortuitum. Із 48 штамів 20 (41,7 %) були чистими культурами нетуберкульозних мікобактерій, 28 (58,3 %) були в мікстах (М. tuberculosis + НТМБ). Найчастіше з мокротиння хворих виділяли M. avium у мікстах з М. tuberculosis — 39,6 %, у чистій культурі M. avium виділяли в 20,8 % випадків. Мінімальною була питома вага M. fortuitum — 6,25 %. При цьому помічено вірогідну різницю між поширеністю M. avium та інших штамів нетуберкульозних мікобактерій.
Висновки. У процесі I Національного дослідження поширення хіміорезистентного туберкульозу в Україні отримано 48 (2,9 %) клінічних ізолятів мікобактерій, які були ідентифіковані як нетуберкульозні. При цьому в 20 (1,2 %) випадках виявлено чисті культури нетуберкульозних мікобактерій.
У 28 (1,7 %) зразках виявлено їх у мікстах, котрі містили як M. tuberculosis, так і нетуберкульозні мікобактерії. Автори наводять схему первинної ідентифікації нетуберкульозних мікобактерій. У структурі нетуберкульозних мікобактерій переважали нефотохромогенні мікобактерії — 77,1 %. Фотохромогенні мікобактерії виділяли у 16,7 % випадків, такі, що швидко ростуть, — у 6,3 %. Для визначення видової належності нетуберкульозних мікобактерій використали систему GenoType® MTB DR (Нain, Laifsains). Виділено такі нетуберкульозні мікобактерії: M. kansasii, M. xenopi, M. avium, M. fortuitum. Частіше з мокротиння хворих виділяли M. avium у мікстах з М. tuberculosis — 39,6 %, в чистій культурі — 20,8 %. Мінімальною була питома вага M. fortuitum — 6,25 %. При цьому зауважено вірогідну різницю між поширеністю виділених штамів M. avium і інших нетуберкульозних мікобактерій
Посилання
avtomatizovanoi sistemi MGIT dla diagnostiki tuberculosu legen i viznachennya medicamentoznoi stiykosti micobacteriy: metodichni reconendacii. K.; 2007:24 (Ukr.).
Zhurilo OA, Barbova AI, Gluchkevich TG, et al. Standarti bacteriologichnoi diagnostiki tuberculosu v laboratoriyach protituberculosnich zakladiv Ukraini: monografiya. K.; 2012:190 (Ukr.).
Labinskaya AS, Kostyukova NN. Opportunisticheskie infektsii: vozbuditeli i etiologicheskaya diagnostika. Rukovodstvo po meditsinskoi mikrobiologii. Kniga III (1). M. BINOM; 2013:752 (Rus.).
Litvinov VI, Makarova MV, Krasnova MA. Netuberculosnie mycobacerii [Non-tuberculosis mycobacteria]. М. MNPCBT; 2008:256 (Rus.).
Mairova AA. Identifikatsiya netuberkuleznykh mikobakterii i vybor optimalnoi kombinatsii metodov dlya ikh vidovoi differentsiatsii: avtoref. dis. …kand. biol. nauk. M.; 2007:26 (Rus.).
Nakaz MOZ Ukrainy. Instrukcija z bakteriologichnoi diagnostyky tuberkuloznoi infekcii. 06.02.2002 r., N 45.
Nakaz MOZ Ukrainy. Unifikovanyj klinichnyj protokol pervynnoi, vtorynnoi (specializovanoi) i tretynnoi (vysokospecializovanoi) medychnoi dopomogy doroslym «Tuberkuloz». 04.09.2014 r. N 620 (Ukr.).
Feschenko UI, Zhurilo OA, Barbova AI, et al. Diferenciaciy mycobacteriy complex Mycobacterium tuberculosis: metodichni reconendacii. K.; 2006:19.
Feschenko UI, Zhurilo OA, Barbova AI, et al. Microbiologichni osnovi provedennay monitoring za medicamentoznou stiykictu shtamiv M. tuberculosis v Ukraini: metodichni reconendacii. K.; 2004:24.
Euzebi J. List of Bacterial Names with Standing in Nomenclature: a folder available on the Internet. Int J Syst Bacteriol. 1997;47(2):590-592. doi:10.1099/00207713-47-2-590.
Feyzioglu B. Comparison of the performance of TK system with LJ and MGIT methods in the diagnosis of tuberculosis. Int J Clin Exp Med. 2014;7(4):1084-1088.
Katoch V. Infections due to nontuberculous mycobacteria (NTM). Indian J Med Res. 2004;120:290-304.
Marras TK, Daley CL Epidemiology of human pulmonary infection with nontuberculous mycobacteria. Clin Chest Med. 2002;23:553-567. doi:10.1016/S0272-5231(02)00019-9.
